Imunoelektroforeza

The Imunoelektroforeza se uporablja za laboratorijsko diagnostično odkrivanje monoklonskih protiteles v pacientovi krvi. Monoklonska protitelesa so pridobljena iz iste celice in so usmerjena proti istim antigenom. Zaradi tega jih je treba oceniti kot patološke in, če se dokažejo, govoriti o boleznih, kot je Waldenströmova bolezen.

Kaj je imunoelektroforeza?

Ioni imajo različno mobilnost. Ta različna mobilnost je osnova za postopek elektroforeze. Te metode ločujejo različne snovi med seboj z uporabo električnih polj in gravitacije. Znana metoda na tem področju je imunoelektrofereza.

To je kvalitativna diagnostična metoda, ki se uporablja za odkrivanje monoklonskih protiteles. Protitelesa so imunološko aktivne beljakovinske snovi iz določene celične linije. Monoklonska protitelesa temeljijo na istih B limfocitih in so zato usmerjena proti enemu epitopu. Vsak naravni imunski odziv na invazivne antigene ustreza poliklonskemu odzivu in je zato usmerjen proti različnim epitopom. Monoklonski imunski odziv torej kaže na patološke telesne procese.

Monoklonska protitelesa vežejo različne molekule z visoko specifičnostjo. To vezavo lahko dokažemo z imunoelektroforezo. Postopek je kvaliteten postopek v laboratorijski diagnostiki in je sestavljen iz dveh vrst postopka, serumske elektroforeze in imunodifuzije.

Funkcija, učinek in cilji

Imunoelektroforeza združuje metodologijo elektroforeze v serumu z imunodifuzijo. Pacientov serum se namesti na agarozni gel ali celulozni acetatni film. Uporablja se tudi kontrolni serum. Aplikaciji sledi elektroforetska ločitev vzorcev. Med ločilnimi črtami se nanesejo antisera, IgG, IgA, IgM, ocetna kislina za normalno elektroforezo ter kappa in lambda.

Tako nastane reakcija s protitelesi v pacientovem serumu, kar ustvari črte padavin. Glede na uporabljeni antiserum ter položaj in obliko posameznih črt lahko sklepamo o imunoglobulinih, ki jih vsebujejo lahke verige kappa ali lambda. V primeru lambda pasu obstajajo proste svetlobne verige iz protiteles. Laboratorij zagotavlja dodatne dokaze s pomočjo redkih IgE in IgD, kar omogoča natančno določitev imunoglobulinov. Metoda imunodifuzijske elektroforeze poteka po Pierru Grabarju in Curtisu Williamsu in ustreza kombinaciji elektroforeze agaroze z geli in difuzije protiteles.

Najprej poteka elektroforeza z agaroznim gelom. Nato protitelesa, ki jih vsebujejo, difundirajo glede na pasove antigenov in tako ustvarijo oborinski lok. To je treba razlikovati od raketne imunoelektroforeze po Laurellu, ki ustreza elektroforezi proteinov v agaroznem gelu, od katerih ima vsa protitelesa v določeni koncentraciji. V gelu je rahlo bazičen pufer, ki samo omogoča, da se antigeni migrirajo in ki skozi izpostavljenost rahlo osnovni vrednosti pH potisne večino protiteles do izoelektrične točke, dokler se ne prenehajo elektroforetično premikati.

Na začetku raketne imunoelektroforeze pride do presežka antigena, tako da nastanejo topni kompleksi antigen-protitelo. Med elektroforezo pride tudi do vezave med antigeni in drugimi protitelesi. Na ta način se na ekvivalentni točki tvorijo imunoprecipitati, ki spominjajo na raketne figure z višino, sorazmerno s koncentracijo antigena. Za oceno preskusa se meri višina oborine.

Tu lahko najdete svoja zdravila

Tveganja, neželeni učinki in nevarnosti

Odkrivanje monoklonskih protiteles je še posebej pomembno za diagnozo multiplih mielomov in Waldenströmove bolezni. Predloženi dokazi govorijo o maligni degeneraciji imunskih celic. Multipni mielom ustreza raku v kostnem mozgu, za katerega je značilno maligno množenje celic, ki proizvajajo protitelesa v plazmi.

Te plazemske celice proizvajajo protitelesa in njihove fragmente. Maligne plazemske celice vedno izvirajo iz skupne predhodne celice in so zato genetsko identične. Proizvajajo samo monoklonska protitelesa. Malignost te bolezni lahko ustreza predrakavi fazi, lahko pa doseže tudi visoko maligno stopnjo, ki brez zdravljenja hitro usodno. Simptomi bolezni so posledica maligne rasti celic ali protiteles in fragmentov protiteles. Najpogostejši simptomi vključujejo bolečine v kosteh, raztapljanje kosti in spontane zlome.

Raven kalcija v krvi se pogosto poveča. Poleg tega se nenormalna protitelesa pogosto odlagajo v tkivu in povzročajo funkcionalne motnje v organih, kar lahko privede do simptomov, kot so odpoved ledvic ali moten krvni pretok. Waldströmova bolezen je tudi maligna tumorska bolezen. Natančneje, gre za maligno bolezen limfoma, ki jo uvrščamo med počasi napredujoče in skoraj asimptomatske B-celične ne-Hodgkinove limfome. V večini primerov je pri bolezni mogoče zaznati nenormalno proizvodnjo monoklonskih IgM zaradi aktivnosti malignih limfomskih celic.

Waldenströmova bolezen je po lastnostih zelo podobna multiplim mijelomom, vendar ponavadi kaže ugodnejši potek. Večina bolnikov z Waldenströmovo boleznijo je v veliki meri asimptomatska glede na diagnozo. Drugi bolniki že zgodaj pokažejo simptome, kot so nespecifična utrujenost ali periferne nevropatije, ki nastanejo zaradi odlaganja monoklonskega IgM znotraj mielinskega plašča. Že majhne količine IgM lahko sprožijo polinevropatijo. Polinevropatija se pri drugih bolnikih ne pojavi, tudi pri visoki ravni. Poleg tega se lahko pojavijo nespecifični simptomi, kot so vročina, neželeno hujšanje ali nočno znojenje. Značilna je tudi bolečina v kosteh.

Zaradi prekomerne proizvodnje IgM kri postane hipervizkozna, tako da so omenjeni simptomi lahko povezani s simptomi hiperviskoznega sindroma. V večini primerov se ta nagnjenost krvavitve kaže v pogostih krvavitvah iz nosu, glavobolih, splošnem slabo počutju ali zamegljenem vidu in akustičnih pritožbah. Da bi odkrili maligne bolezni te vrste, je imunoelektrofereza že dolgo postala standardni diagnostični postopek.